內(nèi)酰胺酶大腸桿菌（大腸埃希氏菌）LAMP試劑盒使用方法

RT-超廣譜RT-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌（大腸埃希氏菌）LAMP試劑盒使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。

柱式水樣DNAout

柱式土壤DNAout

柱式微生物基因組DNAout

柱式細(xì)菌DNAout（50次）

病毒DNA提取

96孔板病毒DNAout(離心法)（1次）

96孔板病毒DNAout(離心法)（5次）

96孔板病毒DNAout(真空法)（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

M13噬菌體單鏈基因組DNAout（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

λ噬菌體DNAout（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一管式病毒DNA-RNAout

一管式病毒DNAout（200次）

一管式病毒DNAout（50次）

柱式病毒DNAout

經(jīng)典法質(zhì)粒DNA提取

96孔板質(zhì)粒DNAout(離心法)

96孔板質(zhì)粒DNAout(真空法)（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

大提無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

大提無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

大提柱式Ti質(zhì)粒DNAout（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

大提柱式質(zhì)粒DNAout

革氏陽(yáng)性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout

中提柱式BAC DNAout

柱式BAC DNAout

柱式Ti質(zhì)粒DNAout（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

柱式酵母質(zhì)粒DNAout

柱式無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

柱式質(zhì)粒DNAout(50次)

一步法質(zhì)粒DNA提取

一步法96孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法）（停產(chǎn)）

一步法96孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法）（停產(chǎn)）

一步法96孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（真空法）（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一步法96孔板質(zhì)粒DNAout（離心法）

一步法96孔板質(zhì)粒DNAout（真空法）（見(jiàn)關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一步法大提質(zhì)粒DNAout